影响ElISA实验效果常见问题原因分析及解决办法-上海继锦化学科技有限公司

ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。

操作步骤	可能原因	解决办法
选择试剂	选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡 30-60 分钟。
加样	1.血清或血浆标本分离不好即进行加样； 2.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）； 3.加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。	1. 标本为血清：将血液先自然存放 12小时后，再用 3000rmp 离心 15 分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合 510次，放置一段时间后，3000rpm 离心 15 分钟；若在几天内检测，可放在 28℃冰箱中，若要贮存，则置于20℃的低温冰箱内。 2. 加样后及时放入孵箱。 3. 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4. 如果采用 AT 或其他全自动加样，选择 FAME 或其他后处理仪器加酶试剂。 5. 标本较多时，请分批操作。
孵育	1. 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗； 2. 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗。	1.贴封片或加盖； 2.按说明步骤严格控制操作时间。