本试剂盒仅供研究使用 zui低检测限：1 ng/ml
特异性：本试剂盒可同时检测小鼠dsDNA （IgG），且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法半定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中dsDNA （IgG）含量。
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用dsDNA-BSA偶联物包被酶标板，制成固相载体。向微孔中先加入待测样品进行反应，然后再加入辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG进行反应，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的dsDNA （IgG）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），评估样本中抗体的含量。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
3. 辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG稀释液 （HRP-anti-mouse IgG Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG（HRP-anti-mouse IgG）：1×120μl/瓶（1：100）。
5. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
6. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
7. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
8. 阴性质控品：1×800ul/瓶 需要而未提供的试剂和器材
1. 标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
试验前用样本缓冲液按1：100的比例稀释病人样本。所以使用2ul的样本+198ul样本稀释液加入聚苯乙烯试管中。混合均匀。阴性质控品已经准备好不需要稀释。
辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG加990μl辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1. 加样：分别设阴性孔、待测样品孔。阴性孔加阴性质控品100μl，余孔加待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟。
2. 甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
3. 每孔加辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃，30分钟。
4. 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色10min。
6. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
7. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
注：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
1．目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显变蓝者为阳性，无色或蓝色不明显者为阴性
2．酶标仪检测：每孔加终止液50ul，酶标仪450nm，空白孔调零。测定各孔OD值。
临界值=阴性对照x2.1
阳性大于等于临界值
阴性小于临界值
临界值注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
5. 在配制检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
6. 底物请避光保存。
7. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂 |
