保存方法:2-8℃保存。 有效期:一年。生产日期:见封口。 工作原理: 辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB在 H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。 试剂盒内容: | 名称 | 规格 | 1 | 5%BSA | 15mL | 2 | 二抗 | 0.5 mL(未稀释的) | 3 | SABC | 15 mL | 4 | H2O 2 | 10 mL | 5 | DAB显色液 | 10 mL | 6 | 枸橼酸盐缓冲液 | |
操作步骤: 1、防脱片剂处理后的切片在二甲苯中脱蜡,然后系列酒精梯度入水,每次3~5 min。 2、0.01mol/L pH7.4 PBS洗涤3次,每次5 min 。 3、3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min; 4、0.01mol/L pH6.0柠檬酸缓冲液(气管在80~88℃,其他组织92℃)复性20min,在溶液中冷却至室温。0.01 mol/L pH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。 5、加入封闭液,于湿盒中感作30min,甩去多余的封闭液。 6、滴加血清到切片上37℃孵育1小时左右或者4℃到第二天清晨, 0.01 mol/LpH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。 7、滴加FITC或者HRP酶标二抗,覆盖切片,置湿盒中37℃闭光感作30min左右,取出后洗涤(方法同上)。 8、DAB显色。 9、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。 |