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酶联免疫吸附测定试剂盒[ELISA Kit]
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人诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)免疫组化试剂盒说明书
点击次数:1025 更新时间:2014-03-18

保存方法:2-8℃保存。

有效期:一年。生产日期:见封口。

 

工作原理:

辣根过氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不会遮盖抗原的结合部位,具有较高活性及特异性,可溶性佳,生成的产物不扩散,可作用于多种底物,产生不同颜色且HRP穿透力强,易进入细胞内。DAB H2O2存在的情况下,可以作为HRP的电子供体,产生褐色的不溶颗粒,可作为显色的试剂。

 

试剂盒内容:

 

名称

规格

1

5%BSA

15mL

2

二抗

0.5 mL(未稀释的)

3

SABC

15 mL

4

H2O 2

10 mL

5

DAB显色液

10 mL

6

枸橼酸盐缓冲液

 

 

操作步骤

1、防脱片剂处理后的切片在二甲苯中脱蜡,然后系列酒精梯度入水,每次3~5 min。

2、0.01mol/L pH7.4 PBS洗涤3次,每次5 min 。

3、3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次,每次5 min;

4、0.01mol/L pH6.0柠檬酸缓冲液(气管在80~88℃,其他组织92℃)复性20min,在溶液中冷却至室温。0.01 mol/L  pH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。

5、加入封闭液,于湿盒中感作30min,甩去多余的封闭液。

6、滴加血清到切片上37℃孵育1小时左右或者4℃到第二天清晨, 0.01 mol/LpH7.4的PBS洗涤3次,每次5 min 。

7、滴加FITC或者HRP酶标二抗,覆盖切片,置湿盒中37℃闭光感作30min左右,取出后洗涤(方法同上)。

8、DAB显色。

9、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

 
 
   
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