分析前质控 人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识： ◎检验项目的基本原理（ELISA 原理）； ◎临床意义； ◎熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点； ◎熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）； ◎熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。 ◎某些特殊项目的检测如抗HIV 等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。 ◎ELISA 原理：1971 年Engvall 等人把免疫组化的EIA 技术应用于临床检验发展为ELISA 技术。 特点：在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂" 酶标记免疫活性物质，进行信号放大； 有二步温育反应二次洗涤过程； 灵敏度特异性相对较高。 局限性：只能检测到ng 水平 精密度差（批内CV15-20%）； 线性范围窄（一个数量级）； 存在"HD-HOOK" 效应。 以乙肝检测为例，卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。 ◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的zui低量的能力；2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。 ◎特异性：指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。 ◎精密度：ELISA 试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围 ◎稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37℃保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为37℃每稳定一天相当于4-10 ℃保存一个半月。 ◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。 ◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。 ◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。 为使仪器保持*工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。 ◎移液器：ELISA 加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内； ◎水浴箱经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差； ◎洗板机每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞； ◎酶标仪经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。 ◎滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201 型紫外-可见分光光度计（波长精度±0.3nm）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。 ◎通噵差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其（内含200ul 甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右）置于8 个通道的相应位置，蒸溜水调零，1 于490nm 处连续测三次 ,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2 板条（8 条共96 孔）分别加入200ul 甲基橙溶液（吸光度调至0.100A左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm 处检测，其误差大小用±1.96s 衡量。 n 零点飘移（稳定性观察）：取8 只小孔杯分别置于8 个通道的相应位置，均加入200ul 蒸溜水并调零，于490nm 处每隔30 分钟测一次，观察各个通道4 小时内吸光度的变化。 ◎精密度评价：每个通道3 只小杯分别加入200ul 高中低3 种不同．浓度的甲基橙溶解，蒸溜水调零，于490nm 作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20 天。分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV 值。 ◎线性测定：用电子天平称取甲基橙配制5 个系列的溶液，于490nm 平行测8 次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差s，并用±1.96s 表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3 种不同浓度的溶血液（测定波长为490nm，校正波长为585nm），先后于8 个通道检测，每个通道测3 次，51 比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。 ◎一般酶标仪无585nm 滤光片，可选用550nm 或630nm 滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm） ◎试剂评价需要有的血清考核盘（ Panel）进行检测，一般实验室不易从生检所或临检中心取得，每进一次试剂评价一次也很麻烦。可以通过间接的信息对试剂进行选择。 ◎根据该试剂生检所批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂； ◎通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣； ◎参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果，这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况； ◎根据部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。 ◎可用作 ELISA 的标本十分广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可作为标本以测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。 n 标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。 ◎抗凝不*的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。 ◎标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5 天内完成测试。如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。 ◎ELISA 的灵敏度>1ng/ml 水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本.zui起码应先做免疫后做生化。 |
